La question critique de tous les microscopes \u00e0 fluorescence est l'utilisation efficace des fluorophores, c'est-\u00e0-dire la d\u00e9tection du plus grand nombre possible de photons provenant des fluorophores excit\u00e9s, ainsi que l'excitation des seuls f luorophores qui se trouvent dans le plan focal. Cette question est abord\u00e9e dans la mise en \u0153uvre par l'EMBL d'un microscope \u00e0 illumination plan unique SPIM , qui n'illumine que les f luorophores dans le plan focal de la lentille de l'objectif de d\u00e9tection. La nappe de lumi\u00e8re est un faisceau collimat\u00e9 dans une direction et focalis\u00e9 dans l'autre. \u00c9tant donn\u00e9 qu'aucun fluorophore n'est excit\u00e9 en dehors du plan focal des d\u00e9tecteurs, la m\u00e9thode fournit \u00e9galement un sectionnement optique intrins\u00e8que. Le nombre total de points temporels observables peut \u00eatre am\u00e9lior\u00e9 de plusieurs ordres de grandeur par rapport \u00e0 un microscope confocal \u00e0 fluorescence. Le facteur d'am\u00e9lioration r\u00e9el d\u00e9pend du nombre de plans acquis et n\u00e9cessaires pour atteindre un certain rapport signal\/bruit. <\/p>\n\n\n\n
Un SPIM se compose de cinq unit\u00e9s de base, qui concernent 1 la d\u00e9tection de la lumi\u00e8re, 2 l'illumination de l'\u00e9chantillon, 3 la g\u00e9n\u00e9ration d'un faisceau de lumi\u00e8re appropri\u00e9, 4 la translation et la rotation de l'\u00e9chantillon, et enfin 5 le contr\u00f4le des diff\u00e9rentes parties m\u00e9caniques et \u00e9lectroniques, la collecte des donn\u00e9es et le post-traitement des donn\u00e9es. Nous d\u00e9crivons tout d'abord les unit\u00e9s de base du SPIM de l'EMBL et ses propri\u00e9t\u00e9s les plus importantes. Nous couvrons ensuite les principes de base qui sous-tendent cet instrument et ses propri\u00e9t\u00e9s uniques telles que l'utilisation efficace des f luorophores, la r\u00e9duction des effets photo toxiques, la v\u00e9ritable capacit\u00e9 de sectionnement optique et l'excellente r\u00e9solution axiale. Nous discutons \u00e9galement de la mani\u00e8re dont une r\u00e9solution isotrope peut \u00eatre obtenue. La configuration optique, le mat\u00e9riel de contr\u00f4le et le sch\u00e9ma de contr\u00f4le sont expliqu\u00e9s en d\u00e9tail. Nous d\u00e9crivons \u00e9galement certains perfectionnements moins \u00e9vidents de l'installation de base qui permettent d'am\u00e9liorer les performances. Les propri\u00e9t\u00e9s de l'instrument sont d\u00e9montr\u00e9es par des images d'\u00e9chantillons biologiques qui ont \u00e9t\u00e9 imag\u00e9es avec l'un des SPIM de l'EMBL.<\/p>\n\n\n\n
2007 Institut am\u00e9ricain de physique.<\/p>\n\n\n\n